微囊藻毒素,MC,Empore,47mm固相萃取膜
前言:
微囊藻毒素(Microcystin,MC)是一類具有生物活性的,自然環(huán)境中廣泛分布的肝毒素。它對人體蛋白磷酸酶1 和蛋白磷酸酶2A 具有抑制作用,與腫瘤促進作用有直接關(guān)系。中國生活飲用水衛(wèi)生標準(GB/T 5749-2006),將飲用水中微囊藻毒素含量限制為1.0μg/L,該標準的實施對水源水的質(zhì)量提出了更高的要求[1]。
實驗中,采用1升水樣通過47mm的Empore™ C18固相萃取膜片(貨號:98-0604-0217-3)處理,并用含0.1%三氟乙酸的甲醇溶液洗脫。然后通過HPLC對提取物進行定量[2]。
1, 實驗過程
所有試劑均為分析純或更高。
微囊藻毒素-LR標準物質(zhì)(農(nóng)業(yè)部環(huán)境保護科研監(jiān)測所,20μg/mL,溶劑:甲醇);
EmporeTM 固相萃取膜:C18,47mm,購自美國CDS公司(貨號:98-0604-0217-3);
甲醇(色譜純, Fisher Chemical)
三氟乙酸(分析純,天津市福晨化學(xué)試劑廠)
磷酸二氫鉀(分析純,北京化學(xué)試劑公司)
磷酸(分析純,國藥集團化學(xué)試劑公司)
純凈水,產(chǎn)自Milli-Q® EQ 7000系統(tǒng),美國密理博Millipore公司
磷酸二氫鉀溶液(0.05mol/L):稱取6.8g磷酸二氫鉀,用水溶解,定容至1000.0mL
磷酸鹽緩沖液:用20%(體積分數(shù))磷酸溶液將磷酸二氫鉀溶液調(diào)至pH到3
0.1%三氟乙酸-甲醇溶液:用甲醇將0.1mL三氟乙酸定容至100.0mL
Sepaths UP 柱膜通用全自動固相萃取系統(tǒng),北京萊伯泰科儀器股份有限公司;
高效液相色譜儀:LC600 二元高壓梯度高效液相色譜,北京萊伯泰科儀器股份有限公司。
微囊藻毒素-LR工作液:將20μg/mL微囊藻毒素-LR標準物質(zhì)用甲醇稀釋至濃度為2μg/mL;
1.3 實驗
1L 自來水中加入100mg硫代硫酸鈉,再加入200μL的 2μg/mL 微囊藻毒素-LR標準工作液,樣品的加標濃度為400ng/L。超聲30min,待萃取。使用同一批EmporeTM 固相萃取膜(C18,47mm)對每個樣品進行四次重復(fù)制備。
將樣品及EmporeTM 固相萃取膜(C18,47mm)加入Sepaths UP 柱膜通用全自動固相萃取系統(tǒng),并按照圖1所示的方法進行Sepaths UP方法編輯并進行固相萃取富集,收集洗脫液。
對洗脫液進行氮吹濃縮,當(dāng)收集液濃縮到近干時,加入流動相定容到1.0mL,待HPLC檢測。
圖1 微囊藻毒素-LR SPE富集方法
色譜柱:LabParts C18反相柱,5μm,4.6×250mm;
波長:238nm;
流速:1mL/min;
柱溫:35℃;
進樣量:20μL;
流動相:甲醇:磷酸鹽緩沖溶液= 65:35
2, 實驗結(jié)果
圖2,微囊藻毒素-LR標準工作液色譜圖(0.4ppm)
3,結(jié)果與討論
本次實驗展示使用EmporeTM 固相萃取膜(C18,47mm,固相萃取柱,貨號:98-0604-0217-3)對自來水中微囊藻毒素-LR進行富集提取的方法。實驗中,樣品經(jīng)固相萃取凈化、濃縮等前處理步驟后,經(jīng)HPLC分析得到微囊藻毒素-LR的加標回收率達80.1%~86.4%,結(jié)果較好。四次重復(fù)實驗RSD=3.1%,通道間的平行性良好。實驗表明,EmporeTM 固相萃取膜(C18,47mm,固相萃取柱,貨號:98-0604-0217-3)適用于消微囊藻毒素-LR的萃取凈化。
4,參考文獻
[1] GB/T 5749-2006 生活飲用水衛(wèi)生標準
[2]GB/T 20466-2006 水中微囊藻毒素的測定
圖 3 加標樣品色譜圖
表1 加標回收率結(jié)果
標樣 | 4 組平行樣回收率,% | 平均值,% | RSD,% | |||
1 | 2 | 3 | 4 | |||
微囊藻毒素-LR | 80.1 | 82.7 | 86.4 | 83.3 | 83.1 | 3.1 |